HT-29人結直腸癌細胞是1964年由Fogh J用移植培養(yǎng)方法和含15%FBS的F12培養(yǎng)液從原發(fā)性腫瘤分離的。近來，已建株的培養(yǎng)細胞用含血清的McCoy’s 5a培養(yǎng)基培養(yǎng)。該細胞系在裸鼠中成瘤，也能在類固醇處理的地鼠中成瘤。該細胞可合成IgA、CEA、TGFβ結合蛋白和黏液素；表達尿激酶受體，但沒有檢測到血漿酶原活性；不表達CD4，但細胞表面表達半乳糖神經酰胺（HIV的可能替代受體）。該細胞系癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos陽性；p53基因過表達，并且在273位密碼子存在G→A突變。
細胞基本信息
左圖：賽庫生物 HT29(200X)
右圖：賽庫生物 HT29(100X）
(ATCC)
【RRID】：CVCL_0320
【生長特性】：貼壁生長
【培養(yǎng)體系】：McCoy's 5a(CellCook cat:CM2002,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級別)
【傳代比例】：1:3傳代（培養(yǎng)面積比）
【傳代方式】：消化3-5分鐘（用0.25%含EDTA胰酶）
【換液頻率】：2~3天換液1次
【凍存配方】：McCoy's 5a+10%FBS+10%DMSO
【難度等級】：++
培養(yǎng)操作
【傳代】：
?：Step 1：當細胞匯合度達80%時傳代；
?：Step 2：將舊培養(yǎng)液吸出，使用0.25%含EDTA胰酶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘（鏡下觀察細胞變圓、間隙增大），待細胞變圓收縮成流沙狀態(tài)脫落后加入含血清培養(yǎng)基終止消化，將消化下來的細胞收集到離心管中；
?：Step 3：1000rpm離心5分鐘，重懸后接種至新培養(yǎng)瓶。
【凍存】：
?：Step 1：細胞匯合度80%以上，活力狀態(tài)較好時，可消化收集細胞沉淀進行凍存。
?：Step 2：細胞沉淀用適量 4 °C 凍存液【McCoy's 5a(含10%胎牛血清)+10%DMSO】重懸， 一瓶 T25 細胞凍存2管（1ml/管），梯度降溫（4℃ 30分鐘→-20℃ 1小時→-80℃過夜→液氮長期保存）或使用程序降溫盒降溫后再轉移至液氮中保存。凍存管需標記細胞名稱、代次、凍存日期。若使用無血清細胞凍存液可省去程序降溫步驟，直接轉入-80℃保存，但仍建議在-80℃放置24小時后再轉移至液氮。
無血清細胞凍存液使用方法與使用效果參考下文鏈接→《無血清凍存液PK常規(guī)凍存液》
【復蘇】：
?：Step 1：液氮取出的細胞放入干冰或液氮中轉移到細胞房，提前準備好相關試劑耗材。
?：Step 2：取出凍存管置于室溫揮發(fā)液氮30s（如放入干冰轉移則不需要揮發(fā)液氮），再轉移到 37 °C 水浴中迅速解凍（1分鐘內）。為了減少污染的可能性，保持凍存管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍存管外壁。
?：Step 3：將含細胞的凍存液轉移到含 4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，1000rpm離心5min去除DMSO ，重懸后接種（建議每個 T25 培養(yǎng)瓶添加 6-8ml 完全培養(yǎng)基）轉移至培養(yǎng)瓶中靜置培養(yǎng)，24小時后更換培養(yǎng)基（去除死亡細胞）。復蘇后24小時內避免移動培養(yǎng)瓶，以促進貼壁。
培養(yǎng)要點
1
一般情況下細胞差不多長滿時按1:3進行傳代，生長周期為3-4天。
2
細胞傳代時放培養(yǎng)箱參考消化3-5min（消化時長以具體消化情況為準），適當控制消化時間，避免消化不充分靠吹打強行讓細胞脫落分散或消化過度造成細胞損傷。
3
本株細胞貼壁較慢，傳代后需要靜置貼壁1-2天，期間減少移動；細胞正常生長過程中會有少量漂浮細胞碎片和黑點，不需要過度換液。
4
細胞呈島狀成簇聚集生長，正常培養(yǎng)過程中會產生少量黑點和漂浮細胞碎片。
5
T25培養(yǎng)瓶長滿通常可以凍存1管，10cm皿長滿可以凍存2管；復蘇初期可能會有大量漂浮細胞，可在48h后更換培養(yǎng)液時將漂浮細胞收集回原瓶。
應用領域
腸道腫瘤機制研究
作為結腸腺癌的代表性細胞株，HT29細胞常用于研究Wnt/β-catenin、PI3K/Akt等信號通路在結腸腫瘤發(fā)生、侵襲和轉移中的作用機制
抗腫瘤藥物篩選
可用于評估化療藥物（如5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑）、靶向藥物及中藥提取物對結腸癌細胞的增殖抑制、凋亡誘導作用，是藥物研發(fā)的重要體外模型
腸道炎癥與屏障功能研究
HT29細胞可與Caco-2細胞共培養(yǎng)構建腸道屏障模型，用于研究炎癥因子、益生菌代謝產物對腸道上皮屏障通透性的影響，助力炎癥性腸病的治療研究
細胞分化機制研究
在誘導劑作用下，HT29細胞可分化為具有功能的腸上皮細胞，常用于探索腸道細胞分化的調控網(wǎng)絡，為干細胞分化研究提供參考
【CELLCOOK賽庫生物HT29細胞系部分引用文獻】
●Yuan J, Li G, Zhong F, et al. SALL1 promotes proliferation and metastasis and activates phosphorylation of p65 and JUN in colorectal cancer cells[J]. Pathology-Research and Practice, 2023, 250: 154827.
●Zhu D, Yuan S, Chen C. Hedyotis diffusa–Sculellaria barbata (HD–SB) suppresses the progression of colorectal cancer cells via the hsa_circ_0039933/hsa-miR-204-5p/wnt11 axis[J]. Scientific Reports, 2023, 13(1): 13331.
●Yu Q. Comprehensive Exploration of SERPINA1 and Alternative Splicing Events within the Goblets in Colorectal Cancer: Implications for Mucin Secretion and Prognosis[D]. Carnegie Mellon University, 2024.
●Li J, Lv J, Chen Y, et al. Tumor suppressor circPDE4D inhibits the progression of colorectal cancer and regulates oxaliplatin chemoresistance[J]. Gene, 2023, 864: 147323.
●Bao M, Li S, Zhu Y, et al. CHL1 inhibits cell proliferation, migration and invasion by regulating the NF κB signaling pathway in colorectal cancer[J]. Experimental and Therapeutic Medicine, 2024, 27(4): 165.
本文所述方法僅供參考，具體操作需結合實驗室條件優(yōu)化。
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