HT-22（小鼠海馬神經元細胞）是從HT-4細胞系亞克隆而來的永生小鼠海馬細胞系，親代HT-4細胞系來源于帶有溫度敏感SV40 T抗原的小鼠神經元組織的永生化；該細胞系保留了海馬神經元的部分特性，是研究神經退行性疾病和神經保護機制的理想模型。
細胞基本信息
左圖：賽庫生物 HT22(200X)
右圖：賽庫生物 HT22(100X）
【RRID】：CVCL_0321
【生長特性】：貼壁生長
【培養體系】：DMEM,high glucose(CellCook cat:CM2016,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級別)
【傳代比例】：1:3-1:4傳代（培養面積比）
【傳代方式】：消化2-3分鐘（用0.25%含EDTA胰酶）
【換液頻率】：2~3天換液1次
【凍存配方】：DMEM,high glucose+10%FBS+10%DMSO
【難度等級】：+
培養操作
【傳代】：
?：Step 1：當細胞匯合度達80%時傳代；
?：Step 2：將舊培養液吸出，使用0.25%含EDTA胰酶置于 37℃培養箱中消化2-3分鐘（鏡下觀察細胞變圓、間隙增大），待細胞變圓收縮成流沙狀態脫落后加入含血清培養基終止消化，將消化下來的細胞收集到離心管中；
?：Step 3：1000rpm離心5分鐘，重懸后接種至新培養瓶。
【凍存】：
?：Step 1：細胞匯合度80%以上，活力狀態較好時，可消化收集細胞沉淀進行凍存。
?：Step 2：細胞沉淀用適量 4 °C 凍存液【DMEM,high glucose(含10%FBS)+10%DMSO】重懸， 一瓶 T25 細胞凍存一管（1ml/管），梯度降溫（4℃ 30分鐘→-20℃ 1小時→-80℃過夜→液氮長期保存）或使用程序降溫盒降溫后再轉移至液氮中保存。凍存管需標記細胞名稱、代次、凍存日期。若使用無血清細胞凍存液可省去程序降溫步驟，直接轉入-80℃保存，但仍建議在-80℃放置24小時后再轉移至液氮。
無血清細胞凍存液使用方法與使用效果參考下文鏈接→《無血清凍存液PK常規凍存液》
【復蘇】：
?：Step 1：液氮取出的細胞放入干冰或液氮中轉移到細胞房，提前準備好相關試劑耗材。
?：Step 2：取出凍存管置于室溫揮發液氮30s（如放入干冰轉移則不需要揮發液氮），再轉移到 37 °C 水浴中迅速解凍（1分鐘內）。為了減少污染的可能性，保持凍存管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍存管外壁。
?：Step 3：將含細胞的凍存液轉移到含 4-6mL完全培養基的離心管中，輕輕混勻，1000rpm離心5min去除DMSO ，重懸后接種（建議每個 T25 培養瓶添加 6-8ml 完全培養基）轉移至培養瓶中靜置培養，24小時后更換培養基（去除死亡細胞）。復蘇后24小時內避免移動培養瓶，以促進貼壁。
培養要點
1
本株細胞生長較快，培養難度不大，細胞匯合度達80%可根據細胞生長情況1:3-1:4進行傳代，生長周期2-3天。
2
細胞貼壁性相對弱一些，培養過程中易出現細胞漂浮，換液時盡量緩慢輕柔沿培養瓶壁或邊緣吸液加液，如果漂浮細胞較多可在傳代時把漂浮部分細胞一起收集，可考慮使用包被過的培養器皿重新鋪板。
3
細胞消化吹打和重懸時需要注意控制吹打力度，不要過于激烈或吹出太多氣泡，以免細胞出現機械損傷導致培養狀態變差。
4
HT22細胞較易凍存，使用我司推薦凍存配方或無血清凍存液測試凍存復蘇效果較好，貼壁率90%以上。
應用領域
神經退行性疾病研究
-阿爾茨海默病、帕金森病模型建立
-神經元凋亡與神經保護機制研究
神經毒理學研究
-興奮性毒性(谷氨酸毒性)機制研究
-重金屬和環境毒素對神經細胞的影響
藥物篩選
- 神經保護藥物高通量篩選
- 中藥有效成分的神經保護作用評估
細胞信號通路研究
- MAPK、PI3K/Akt等信號通路在神經細胞中的作用
- 氧化應激與細胞存活機制研究
本文所述方法僅供參考，具體操作需結合實驗室條件優化。
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